SOP文件 | 过氧化物酶染色四甲基联苯胺法操作规程及临床意义

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2024-08-29

实验原理：

粒细胞和单核细胞的胞浆中含有过氧化物酶，此酶能使过氧化氢释放出新生态氧，将联苯胺氧化成联苯胺蓝。后者与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆内。

目的：提高血细胞认知的准确率，有利于髓系与其它类型的白血病的区别。

试剂：

1、0.1%TMB（3、5、3＇、5＇－四甲基联苯胺）乙醇溶液：0.1gTMB溶于100ml88%乙醇中，置棕色瓶内，于冰箱保存。

2、亚硝基铁氰化钠饱和液（360g/L）。

3、稀过氧化氢溶液（新鲜配制）：30g/L过氧化氢0.3ml，加蒸馏水25ml即可。

4、瑞氏染液。

操作方法：

1、配制0.1%TMB－亚硝基铁化钠饱和液的混合试剂（二者之比为10∶1，新鲜配制，呈淡黄色）。

2、于新鲜干燥涂片上滴加上述染液3～5滴，使之盖满涂片，1min后加等量稀释过氧化氢溶液，染4～8min。

3、流水冲洗，再用瑞氏染液复染5～20min。

结果判断：

胞浆中有蓝色颗粒者为阳性。颗粒粗大密集者为强阳性，稀疏细小者为弱阳性。

质量控制：

TMB配制在85%～88%的乙醇溶液染色效果较好，乙醇浓度过高，易使细胞表面蛋白凝固，影响着色。稀过氧化氢溶液须新鲜配制，且浓度不宜过高。染液PH以5.5为宜。

临床意义：

过氧化物酶主要存在于粒系细胞中，除早期原粒外，其后各阶段均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。从幼稚单核起呈弱阳性，各阶段淋巴细胞均呈阴性，故本染色法有助于急性白备病的鉴别诊断。急性粒细胞性白血病多呈阳性，急性单核细胞性白血病呈弱阳性，急性淋巴细胞性白血病则呈阴性，FAB分型规定阳性率<0.03。也可用于区别早幼粒细胞白血病和单核细胞性白血病，前者呈阳性，后者弱阳性；区别异常组织细胞和单核细胞，前者为阴性。

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